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MitoGreen是具有细胞膜渗透性的线粒体绿色荧光探针，含有一个温和的巯基反应性氯甲基基团，可用于标记线粒体，并在固定之后保留在线粒体内。标记线粒体，细胞可以与Mitogreen探针简单孵育，探针通过被动扩散传过质膜，并在有活性的线粒体内富集。一旦线粒体被标记，细胞再用醛基类固定剂固定之后，就可以进一步做下游实验的深入处理。这些MitoGreen染料可以解决一些致病性细胞上研究所面临的困难，因为标记线粒体可以在细胞被固定之前开展。

虽然传统的荧光染料，如四甲基罗丹明和罗丹明123，很容易识别功能性线粒体，但是这些染料一旦在线粒体去极化时也很容易被洗涤出线粒体。这些缺点限制了常规染色实验中所用的醛类固定剂，以及一些实验用的处理药品的选择。而本染料可以很好的解决这一问题。

1. 本探针不适用于用乙醛固定的组织和细胞。
   
2. 最佳的染色探针浓度取决于不同的应用程序类型，此处建议的初始条件是基于验证的特定细胞类型，具体实验中应摸索加以调整。

1. 准备染色：
   本试剂盒提供的MitoGreen大约为0.5mM，用之前，以HBSS或不含血清、酚红的培养基稀释MitoGreen原液至工作液浓度。
   注：一般来说，活细胞标记，探针工作浓度为25～500nM，为了减少可能的线粒体毒性超负荷，选择尽可能低的染料浓度。
   
2. 染色贴壁细胞：
   以步骤1准备的预热染色液，37℃孵育15～45分钟。完成染色后，更换新鲜预热的培养基或缓冲液，用荧光显微镜或者荧光酶标仪观察细胞。
   
3. 染色悬浮细胞：
   离心细胞，弃上清，用预热的步骤1配制的染色液悬浮细胞，37℃孵育15～45分钟。完成染色后，更换新鲜预热的培养基或缓冲液，用流式细胞仪或者荧光微孔板读数仪、或者荧光显微镜进行分析。